绵阳临床前动物实验DNA水平「英瀚斯」

实验原理

高架十字迷宫（the elevated plus maze,EPM）是评价啮齿类动物焦躁反应的实验方法 , 相较伤害性刺激所致小鼠焦躁行为检测（如电刺激 、 噪声刺激 、 饮食剥夺和暴露在捕食者气味等）, 该实验具有操作简单的优点 , 能直观反映小鼠的条件应答 。 EPM实验是在高架Y型迷宫的基础上发展而来的 。 EPM由开臂（open arms和闭臂（closed arms）各两条组成 , 呈十字形交叉 , 交义部分为中央区 , 距地面有一定高度 。其原理是由于面对新事物开臂 小鼠会产生好奇心去探究 , 而它们有嗜暗的天性（闭臂）, 两者之间发生探究与回避的冲突行为，产生焦躁心理。整个迷宫距离地面的高度相当于人类站在悬崖边，易导致动物产生恐惧不安的心理。可以通过对比小鼠在开臂和闭臂内的滞留时间和路程来评价小鼠的焦躁行为。

EPM实验在药品开发和研究中得到广泛的应用：主要用于苯二氮卓类药品的抗焦躁作用研究 及筛选具有抗焦l虑作用的新药,也被用于研究精神性药品滥用的影响及激s素的功能,应激对生殖、衰老、妊s娠的影响等。抗焦l虑药主要选择性地抑制边缘系统 的海马、杏仁核 ,产生抗焦躁作用。

高架十字迷宫试验 ：

EPM ) 既可以建立焦躁应激的模型也是国际上公认的经典测量焦躁反应的方法。其原理是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐 惧心理, 形成动物的矛盾冲突来考察大鼠的焦躁状态。 EPM 测试的项目中, 焦躁动物的 OE% 和 OT% 会明显降低, 经典抗焦躁药则使两者升高, OE + CE 反映了动物的运动活性。本研究发现模型组大鼠的 OE% 和 OT% 显著下降, 运动活性也降低。HD反映了动物在非保护区内的探索行为, 代表动物对陌生环境的好奇探究或因恐惧而寻求逃避, 与焦躁程度有一定相关性, 本研究中空瓶应激后的大鼠 HD行为减少; RR可用来观察药有无镇静作用及镇静强度。上述结果证实, 慢性应激后的大鼠明显处于焦躁状态, 说明慢性焦躁应激大鼠模型的制备成功, 且通过量化的标准客观反映出大鼠的焦l虑程度。

脑组织组化实验

1. 灌注固定用的针头，一般都用注射针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。

2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。