泸州293t细胞细胞株构建 英瀚斯

大鼠主动脉内皮细胞的分离培养

方法：分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,Ⅷ因子表达阳性,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型.

Q:如何避免中沉淀物的出现？

A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：

（1）热灭活；

（2）在 37℃ 下培养；

（3）反复冻融；

（4）γ 射线照射；

（5）长期储存在 2-8℃；

（6）在室温下放置时间过长

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以  400g  离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。

细胞冻存有哪些注意事项？

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是的。分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件。

细胞冻存的步骤：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的冻存培养液;

取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入适量胰蛋白酶 (覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞消化下来;

离心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的终密度为 5×106/ml~1×107/ml;

将细胞分装入冻存管中，每管 1~1.5 ml;

在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。(3)PBS缓冲液充分漂洗软gu小块3次，然后用小剪刀将软gu块切碎至约Imm3大小。