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BrdU染色原理

 BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。

注射或细胞培养后利用抗Brdu单，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合，不能直接与抗Brdu反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。干细bao培养诱导分化干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞，理论上具有***分裂能力，在特定条件下，可分化成特定组织。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG孵育、



呈色，显示进入S期细胞的情况。

细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下：

1.细菌污染

细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。

解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。细胞组技术人员毕业于东南大学、华中科技大学等高校生物学相关***，具有硕士研究生以上学历，熟练掌握细胞学相关实验，可开展多种细胞实验。所以一定要注意！下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生su。

关于细胞培养的常见问题:

Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？

A: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 PBS 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 PBS 重悬，离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。

Q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？

A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。

Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？

A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?

A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛；FCS 不是正规命名，尽量不使用。Calf Serum（CS）则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。

什么是脂质体？脂质体转染的原理和步骤？

细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等。

一、脂质体 (liome) 转染方法原理

脂质体 (liome) 转染方法原理：脂质体 ((Iiome) 作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹 DNA，同样可以通过融合而进入细胞。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性的。

中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA，借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件。带正电的阳离子脂质体，DNA 并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上，形成 DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。