江苏动物实验室分子生物学检测「英瀚斯」

在各种致病因素作用下，大脑实质受到损伤后可出现神经功能改变，如偏瘫、平衡失调等。

对于神经系统疾病动物模型而言，造模结束只是步，验证个体模型是否成功是第二步，而控制组内个体特征一致性是第三步。

采用神经功能评分是重要的观察指标，可以用来在体评价模型是否成功或者病变严重程度。尽量控制动物模型的评分一致性是很困难但不得不做的一件事。

这里介绍三种常见的啮齿类神经功能评分方法。

一、【Longa评分法】

① 无神经功能缺陷：0分；

②瘫痪侧前爪不能完全伸展：1分；

③行走时向瘫痪侧转圈：2分；

④行走时向瘫痪侧倾倒：3分；

⑤不能自动行走，存在意识丧失现象：4分。

二、【Bederson评分法】

抓起动物的尾巴，使动物离台面10cm高。此时，正常大鼠的前爪处于伸直状态，而存在神经功能病变的动物则可出现如下表现：

②动物尾巴提起后，瘫痪侧前肢回收并屈于腹下，而正常侧肢体伸向台面：1分；

③除第二条表现以外，俯卧于台面时向瘫痪侧侧推动物的阻力较正常侧明显降低：2分；

④除条和第二条以外，动物行走时向瘫痪侧旋转：3分。

三、【平衡木评分法】

一根长为80cm、宽为2.5cm的木条，水平固定在离台面10cm高度的地方，然后让动物在木条上行走。

①能跳上平衡木条，可以自由行走但不跌倒：0分；

②能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会小于50%：1分；

③能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会大于50%：2分；

④动物在正常侧身体的帮助下可以跳上平衡木条；但是瘫痪侧的后肢不能够帮助身体向前移动：3分；

⑤动物无法在平衡木条上行走，但是可以坐在木条上：4分；

⑥将动物放在木条上，动物很快会掉落下来：5分。

脑组织组化实验

1. 灌注固定用的针头，一般都用注射针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。

2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。

1.3改良多平台睡眠剥夺法

在MMPM 中将 10 只大鼠(具体数目可根据实际需要确定)同时放在装有 14 或 15 个台的水槽中(长 127 cm ，宽 44 cm ，高 45 cm )进行实验，这样既避免了 SP及M P中单只大鼠与群体隔离的缺点，又保留了 M P 中活动范围增大的特点，因在实验时大鼠多是 3 只或 4 只一笼进行饲养，如 1 组实验需 10 只大鼠，则需要3笼或 4笼大鼠，考虑到来自不同笼的大鼠放在一起实验也可能造成群体的不稳定，有学者将实验方法进一步改良，将实验所需的 10 只大鼠放在同一只笼中饲养 2 周，实验时再将这些大鼠放在一起同时进行睡眠剥夺实验，这样以克服实验时大鼠群体不稳定的缺点，从而将实验时的不确定因素减至低! 实验研究发现在MMPM中'经采取措施保持大鼠群体稳定性及避免大鼠与群体分离后' 大鼠上腺重量%体重减轻量%中促上腺皮质(A CTH )和上腺皮质酮 (CO RT) 的含量均较M P中为低，提示M M PM 较 M P 具有更低的应激性，是较为理想的REM 剥夺方法。

3轻柔刺激法

此方法在短期的睡眠剥夺实验中应用较多，当实验人员通过观察大鼠行为或通过脑电波监护观察到大鼠进入睡眠时，通过轻轻拍打大鼠笼子或应用声音、光线的刺激促使大鼠保持清醒，必要时还可用纸卷、铅笔或用手直接触摸大鼠使大鼠无法进入睡眠。注意不能将大鼠移出笼外!此方法简单易行，在脑电监护情况下可进行 TSD 或 SSD 实验，在无脑电监护时需要实验人员在旁不间断观察大鼠行为，故较适合行短时间的睡眠剥夺实验。

4睡眠剥夺法

定时给大鼠注射， 此类方法简单易行，操作方便，不需要特殊仪器。缺点是大鼠存在个体差异， 睡眠剥夺的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊药理作用的实验中。