细胞周期消化系统模型「英瀚斯」

透射电镜观察自噬小体方法

利用光学显微镜，借助相应的染色方法，可以观察细胞凋亡时会出现的一系列形态特征。常用的染色法包括台盼蓝、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光学显微镜下可以观察到核固缩、质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡现象。

电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法，被认为是确定细胞凋亡的金标准。电镜下凋亡细胞表现为染色质凝集、核浓缩、核裂解、胞浆收缩和胞膜具有发泡现象及凋亡小体出现等。

BrdU染色原理

 BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。25克胰酶蛋白酶(活力为1:250)，加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。

注射或细胞培养后利用抗Brdu单，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。一般流程：transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照结果示例：图A细胞划痕实验图。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合，不能直接与抗Brdu反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG孵育、



呈色，显示进入S期细胞的情况。

Q:中可能出现的沉淀物是什么？

A:基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛以及其它中可能会存在以下种类的沉淀物：

（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到 1-2mm，可以用肉眼观察到。CellCountingKit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。因为都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。

（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使出现浑浊，并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点， 这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。

（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是中出现沉淀物的常见原因。