成都dna检测分子生物学检测「英瀚斯」

腺相关病毒包装原理

腺相关病毒( adeno-associated virus, AAV)是一类细小病毒, 基铟组为单链DNA ,对分裂细胞和非分裂细胞均具有gan染能力。通常需要腺病毒或疱zhen病毒帮助其在体内fu制扩增。重组腺相关病毒( recombinant AAV, rAAV )是利用AAV2型基因组与不同xue清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体,可将目的基因的CDS区序列或者RNAi干扰序列插入rAAV表达质粒中,包装病毒后gan染细胞完成对目的基因的操作。腺相关病毒具有gan染温和,免yi原性小,长效稳定表达的特点,主要应用于动物体内注射。源井生物提供的腺相关病毒颗粒经过超su离心纯化,并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。双向电泳分离待测样品(1)一相等电聚焦前处理按照所用仪器的厂商提供操作手册进行。腺相关病毒的滴度在10^12~10^13GC/ml ,可以满足各类整体实验的使用要求。

13.合成的引物5'端是否有磷酸化

答：合成的引物5'为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。

14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？

连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。结束反应,PCR产物放置于4°C待电泳检测或-20°C长期保存。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。

20.Primer设计的基本原则是什么？

答：引物设计的下列原则供您参考。

◆引物长度一般在18-35mer。

◆G-C含量控制在40-60%左右。

◆避免近3'端有酶切位点或发夹结构。

◆如果可能避免在3'端5个碱基有2个以上的G或C。

◆如果可能避免在3'端1个碱基为A。

◆避免连续相同碱基的出现，特别是要避免GGGG或更多G出现。

◆退火温度Tm控制在 58-60C 左右。

◆如果是设计点突变引物，突变点应尽可能在引物的中间。

21.为什么引物的OD260/OD280小于1.5 ？

答：引物应该全是DNA，但是OD260/OD280的比值为什么那么低，怎么会有蛋白质污染？借助***的技术优势，英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备，如SLAN48P荧光定量PCR检测系统、PCR仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。引物化学合成，哪里有机会污染到蛋白质？需要指出的是OD260/OD280的比值不能用来衡量引物的纯度。OD260/OD280的比值过低一般是由于引物中C/T 的含量比较高所致。下表是一个20mer 同聚体引物的OD260/OD280的比值，清楚表明OD260/OD280的比值与引物的碱基组成密切相关。