徐州感受态细胞消化系统模型「多图」

MTT检测

MTT 是一种检测细胞存活和生长的方法。通常改变抑制ES细胞不分化状态的培养条件,ES细胞就可以分化成多种细胞类型。其检测原理为活xi胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。

骨sui内皮祖细胞的分离培养

方法:使用密度梯度离

心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133 表达情况.结果与结论:培养前4 d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,CD133+细胞占19.2%,CD34+细胞占28.7%,CD34+ /CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：

(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。

(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下：

①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。

②旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。

③室温下放置 5～10 分钟，使 DNA 结合在脂质体上。

(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。

(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM，继续培养 14～24 小时，

(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM，2 mL/孔，再培养 24～48 小时。

(6) 用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。

3、稳定的脂质体转染方法如下：

(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。

(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。

(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM，37℃ 培养 48 小时。

(4) 吸出 DMEM，用 G418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。