流式细胞消化系统模型「英瀚斯」

关于细胞培养的常见问题:

Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？

A: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 PBS 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 PBS 重悬，离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。

Q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？

A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。

Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？

A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?

A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛；FCS 不是正规命名，尽量不使用。Calf Serum（CS）则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。

1、操作步骤 [方法一]：

(1) 细胞培养：取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 个细胞培养液，37℃ CO2 培养至 40%～60% 汇合时 (汇合过分，转染后不利筛选细胞)。

(2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液：用不含培养基稀释 1-10 μg DNA，终量 100μL，B 液：用不含培养基稀释 2-50 μgLR，终量 100μL，轻轻混合 A、B 液，室温中置 10-15 分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致，应酌情减量)。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，终产生标志性蛋白质。

(3) 转染准备：用 2 mL 不含培养液漂洗两次，再加入 1 mL 不含培养液。

(4) 转染：把 A/B 复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃ 温箱置 6～24 小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。

(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。

4.  各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分钟合适；胚胎细胞耐受性较小，不宜太快。总之在一开始时，下降速度不能超过－10℃/ 分钟。

5.  用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用 DMSO 较好，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中很好。

6.  原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。

7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免

8. 注意自身的安全，对于来自人源性或病毒的细胞株应特别小心。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心有毒性试剂例如 DMSO，并避免尖锐物品伤人等。