癌细胞消化系统模型「在线咨询」

细胞增殖检测

     本公司应用MTT比色法， 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的Formazan，用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值，可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。置于37目，5%CO2的细胞培养箱中培养2-3周，计数含50个细胞以上得克l隆，计算细胞集落形成率，Spotll采集图像。

     该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏感性测定等。服务内容      1. 细胞接种：收到客户细胞后，我们会用细胞计数板计数细胞，得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数，按MTT试剂盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液；3x106细胞悬浮于15mlMEF生长培养基中，接种到200ml培养瓶中。

     2. 细胞培养：然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板，并实时观察细胞状态；  

     3. yao物处理并呈色：按不同浓度梯度加入yao物作用细胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT检测试剂，按操作要求孵育相应时间，在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。

骨sui内皮祖细胞的分离培养

方法:使用密度梯度离

心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133 表达情况.结果与结论:培养前4 d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,CD133+细胞占19.2%,CD34+细胞占28.7%,CD34+ /CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

大鼠shen小球内皮细胞分离培养

2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:SD大鼠用25%乌拉坦腹整注射麻zui后仰卧固定。胸腹部消森并分离胸主动脉,以无菌的冷Hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白,取出双shen冰浴保存。2)阳性CD117(c-kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试。

(2)shen小球分离:参照Green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块，轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。

(3)shen小球消化和培养；软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:(1)取对数生长期细胞，用0。将提取的shen小球加人0.1% IN 型胶原酶消化后收集沉淀。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内,加A配制好的内皮细胞培养液(MFM.Hepes 20 mmnoVL 20%胎牛xue清0. 66 U胰岛素/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、肝素钠100 u/ml.青莓su100 U/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。