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MTT检测

MTT 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm。

透射电镜自噬小体检测

胰酶消化，收集作用后的细胞，离心，先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的PBS溶液中保存在4C中过夜。

再用乙醇梯度脱水，接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定，后用重金属醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色。通过TEM分析凋亡细胞内超微结构变化，拍照保存。

贴壁细胞:先倒出培养液，采用胰蛋白酶消化或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心，100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散， 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液，固定约1h-2h. 也可在4C冰箱过夜。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比，3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。

细胞传代培养

操作步骤

1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1- -3分钟。(3)从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取DMEM/F12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

附:消化液配制方法:

称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。

细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下：

1.细菌污染

细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。

解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生su。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。