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南京英瀚斯生物科技有限公司

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四川pcr实验室服务介绍「英瀚斯」

发布时间:2022-07-10 19:58:00        作者:英瀚斯







分子生物学服务

 公司建有100平米分子实验室,配备有PCR仪、定量PCR仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。蛋白质上样浓度不要超过10mg/mL,否则会造成蛋白质的聚集或沉淀。分子组技术人员毕业于中国农业大学、华中科技大学同济医学院、浙江理工大学等高校生物医学相关,全部具有硕士研究生以上学历,熟练掌握分子生物学相关实验,可开展多种分子生物学检测服务。











分子实验室部分设备





蛋白质双向电泳实验流程

1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白

2.双向电泳分离待测样品

(1)一相等电聚焦前处理按照所用仪器的厂商提供操作手册进行。蛋白质上样浓度不要超过10mg/mL,否则会造成蛋白质的聚集或沉淀。

(2)等电聚焦完毕后(约需24hr),若不立即进行第二相电泳,胶条可夹在两层塑料薄膜中于-70℃保存数月。

(3)等电聚焦好的胶条按厂商提供的操作手册平衡两次。平衡完毕后,于电泳仪上用12.5%SDS-PAGE凝胶进行电泳分离。仪器设置为2.5W/胶 45min,15W/胶 5-8hr,20℃。

3.银染法对凝胶进行染色

(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)显影(8)定影(9)水洗

3.凝胶扫描及图像分析

(1)图像扫描:凝胶染色后采用Image scanner以300dpi,16-bit模式(65536灰阶)进行扫描。

(2)图像分析:扫描完毕后,凝胶继续置于1%yi酸中于4℃保存。4、聚合完成后,SYBRGreen染料与双链产物结合,定量PCR系统检测到荧光的净增量加大。扫描后的图像用ImageMaster 2D Platinum software软件进行分析。分析按照软件厂商提供的说明书进行。以zui小点面积30,平滑度2为主要参数zui大限度检测蛋白质点。以目标蛋白质3个重复具有相同趋势,目标蛋白质相邻位点的相对一致性,至少2个重复有2倍以上差异作为判定差异表达蛋白质的标准。







单细胞测序(英语:Single cell sequencing)采取优化的下一代DNA测序技术(NGS)检测单细胞的序列,可以获得特定微环境下的细胞序列差异以方便研究其功能差异等。标准的生物信息学分析能够得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究内容,靶向调控网络、ceRNA网络、共表达网络分析可以将这几种RNA联合起来分析,从而发现新的调控网络模型。对个体细胞的DNA测序可以帮助我们了解例如在中的小范围细胞的变异;对其进行RNA测序可以帮助我们了解和鉴别不同的细胞类型与其表现的基因,对研究发育生物学等有较大裨益。


分离单细胞

在全基因组扩增和测序前,有很多方法可以分离细胞个体,其中流式细胞术(FACS)较为常用。个体细胞可以用显微操作来收集,这样较为快捷而且成本较低,但是比较有技术难度,而且显微镜下对细胞的错误分类容易影响实验结果。(3)在PCR仪上进行热变性(95C2min),冰中骤冷,待_上机。激光捕获显微切割技术(LCM)亦可以用来收集单细胞。但是尽管激光捕获显微切割可以保留样本细胞在组织中的空间位置,但是捕获单细胞的时候容易连带周围细胞的物质。高通量的细胞个体分离还可以使用微流控技术。微流控技术和流式细胞技术都能准确而自动地分离无偏样本。但是,两种方法都要求首先将细胞从其为环境中脱离,因此可能在RNA表达分析中造成对转录数据的干扰。






5.长可以合成多长的引物?

答:引物越长,出现问题的概率就越大。人体腺病毒已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2。有的公司合成过120base的引物,产率很低。除非需要,建议合成片段长度不要超过80mer,按照目前的引物合成效率,80mer的粗产品,全长(还不一定正确)引物的百分比不会超过40%,后续处理还有丢失很多,的产量很低。

6.需要合成多少OD数?

答:根据实验目的确定。一般PCR扩增,2 OD引物,可以做200-500次50ul标准PCR反应。miRNA在物种进化中相当保守,在动物、植物和真菌等中发现的miRNA表达均有严格的组织特异性和时序性。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 OD就足够了。但是有些研究人员,就做几次PCR,但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长,但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 全长得率就越低,出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求,其实也是对社会资源的一种浪费,同时也从一个侧面反映了部分研究人员特别是新手的自信心不足,总觉得需要重复多次才能成功。





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