企业等级: | 普通会员 |
经营模式: | 商业服务 |
所在地区: | 江苏 南京 南京市 |
联系卖家: | 戴经理 先生 |
手机号码: | 13770566402 |
公司官网: | enhancer.tz1288.com |
公司地址: | 江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301 |
发布时间:2022-06-12 22:25:00 作者:英瀚斯
甲l基化特异性的PCR
Herman 等( 1996 )在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;ceRNA是目前转录调控领域的热点内容之一,通过全转录组研究能够系统性的阐述ceRNA的分子作用机制。随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化;反之,说明被检测的位点不存在jia基化。
特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生jia基化。
亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
亚硫酸氢盐修饰后测序法( BSP ) Frommer 等( 1992 )提出的研究 DNA jia基化方法,此方法可靠性及jing确度高,能明确目的片段中每一个 CpG 位点的jia基化状态。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化,称为BSP-直接测序法。针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物,做qPCR实验,验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合,或者将分离出来的RNA做高通量测序,筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。将PCR产物克long至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-ke隆测序法。
特点:jing确度高,能够准确检测出jia基化的程度百分比。
聚合酶链式反应(PCR)
操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
1QPCR buffer
5 μl
dNTP mix( 2mM )
4 μl
引物1(10pM)
μl 2
引物2 ( 10pM)
2μl
Taq酶(2U/ul)
1 μl
DNA模板( 50ng-1μg/μl )
加ddH2O至
μl 50
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上执行扩增。-般:在93°C
预变性3-5min ,进入循环扩增阶段: 93°C 40s→58°C 30s→72°C 60s ,循环30-35
次,后在72°C保温7min。
3.结束反应, PCR产物放置于4°C待电泳检测或-20°C长期保存。
4. PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100ul进行抽提反应混合液,以
除去石蜡油;否则,直接取5- 10μl电泳检测。
LncRNA芯片
Long non-coding RNAs(lncRNAs)是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码RNA分子。目前的研究已证实,lncRNA参与X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录ji活,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注,lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。microRNA芯片:RNA干扰(RNAInterference,RNAi)现象是一种进化上保守的抵御***或外来病毒qin犯的防御机制。
筛选出差异表达的lncRNA是研究其在人类疾病发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncRNA芯片进行lncRNA表达谱分析,该芯片基于Agilent的SurePrint技术生产,实验。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncRNA数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncRNA检测。
lncRNA和mRNA同时检测:芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncRNA和mRNA进行分析。
平台成熟可靠:采用Agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特异性。
数据分析:提供lncRNA和mRNA表达谱差异分析和功能分析,以及二者的关联分析。
单细胞RNA测序
单细胞RNA测序也称scRNA-Seq。研究人员利用安捷伦、Illumina和NimbleGen的外显子组测序平台对同一个人类血液样品进行分析。通常而言,一般的组织细胞RNA-seq实验会产生1000万个读数,如果一个基因的频率超过50RPKM,即每百万读数中每千个碱基中超过50个,这一基因即被认为有表达。泊松分布下,1kb长的基因有超过500个读数和4%的小变异系数,即CV值;哺乳动物细胞通产含有200,000个mRNA,因此至少要用50个单细胞一起才能到达小CV值;考虑到逆转录的效率和环境干扰等因素,为得到准确的表达和细胞种类的识别,需要使用的细胞数量实际要更多。
免责声明:以上信息由会员自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布会员负责,天助网对此不承担任何责任。天助网不涉及用户间因交易而产生的法律关系及法律纠纷, 纠纷由您自行协商解决。
风险提醒:本网站仅作为用户寻找交易对象,就货物和服务的交易进行协商,以及获取各类与贸易相关的服务信息的平台。为避免产生购买风险,建议您在购买相关产品前务必 确认供应商资质及产品质量。过低的价格、夸张的描述、私人银行账户等都有可能是虚假信息,请采购商谨慎对待,谨防欺诈,对于任何付款行为请您慎重抉择!如您遇到欺诈 等不诚信行为,请您立即与天助网联系,如查证属实,天助网会对该企业商铺做注销处理,但天助网不对您因此造成的损失承担责任!
联系:tousu@tz1288.com是处理侵权投诉的专用邮箱,在您的合法权益受到侵害时,欢迎您向该邮箱发送邮件,我们会在3个工作日内给您答复,感谢您对我们的关注与支持!