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宜宾细胞生物学服务周到「英瀚斯」

发布时间:2022-06-03 14:43:00        作者:英瀚斯







流式细胞分选

流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。因组织细胞内无内源性Brdu存在,所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合,不能直接与抗Brdu反应,需经解链使Brdu暴露方能被染色。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。





关于细胞培养的常见问题:


Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理?

A: 贴壁细胞在移除原培养液后,用 PBS 冲洗 2-3 遍;悬浮细胞离心移除原培养液后,加入 PBS 重悬,离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍,用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。

Q:细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗?

A:长期保存的细胞应当放在液氮(-196℃)中保存,短时间(一般 1 周-2 周)可以存放在 -80℃。

Q:培养瓶是用密封盖好,还是用透气盖好?

A:都可以。只是在使用密封盖培养瓶时,瓶盖旋至约 2/3,不要完全拧紧,预留约 1/3 以便细胞可以透气;有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?

A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别,都是指胎牛;FCS 不是正规命名,尽量不使用。Calf Serum(CS)则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。



Q:中可能出现的沉淀物是什么?

A:基于多年的实验研究,用于细胞培养的胎牛以及其它中可能会存在以下种类的沉淀物:

(1)纤维蛋白,它是经常出现的较大的沉淀物,可以达到 1-2mm,可以用肉眼观察到。细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系慢病毒包装:公司使用3质粒慢病毒包装系统,慢病毒系统使用pLKO。因为都是在低温下进行收集和快速处理的,一些纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体)在处理过程中仍然处于溶解状态,当经过的过滤分装后,就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。

(2)磷酸钙,它也是常见的一种沉淀物,通常会使出现浑浊,并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点, 这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。

(3)胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是中出现沉淀物的常见原因。





关于细胞冻存的注意事项:

1.  为保持细胞大存活率,一般都采用慢冻存融的方法。

2.  冻存物距液氮面越近温度越低。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。标准的低冻速度为-1℃~12℃/ 分钟,当温度下降达-25℃时,下降速度可增至-5~-10℃/ 分钟,到-100℃时则可迅速冻入液氮中。因此要适当掌握冻存物下降入液氮中的速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促冰晶形成。

3.  初次冻存者在下降冻存时,宜先用细木棒伸入罐中探测液面位置,然后需用温度计与冻存物并行的办法,以观测下降冻存物的速度、冻存物与液氮液面距离和温度三者关系,当已掌握以上各参数和冻存技术熟练后,仅按下降时间和下降距离便可获理想冻存效果。





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