四川实时荧光定量pcr来电洽谈 南京英瀚斯生物科技

甲l基化特异性的PCR

Herman 等（ 1996 ）在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。技术流程：dsRNA或pre-miRNA被导入细胞后，能够被一种特异的核酸内切酶（Dicer）识别并切割成为小片段，这些片段在RNA解旋酶的作用下解链。该方法敏感性高，主要用于作定性研究。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧定不变；随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在jia基化；反之，说明被检测的位点不存在jia基化。

特点：适用范围广，能够检测特异位点是否发生jia基化。

亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）

亚硫酸氢盐修饰后测序法（ BSP ） Frommer 等（ 1992 ）提出的研究 DNA jia基化方法，此方法可靠性及jing确度高，能明确目的片段中每一个 CpG 位点的jia基化状态。-般:在93°C预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93°C40s→58°C30s→72°C60s,循环30-35次，后在72°C保温7min。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定，zui后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化，称为BSP-直接测序法。将PCR产物克long至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为BSP-ke隆测序法。

特点：jing确度高，能够准确检测出jia基化的程度百分比。

LncRNA芯片

Long non-coding RNAs（lncRNAs）是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码RNA分子。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。目前的研究已证实，lncRNA参与X染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录ji活，转录干扰，核内运输等多种重要调控过程。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注，lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。

筛选出差异表达的lncRNA是研究其在人类疾病发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncRNA芯片进行lncRNA表达谱分析，该芯片基于Agilent的SurePrint技术生产，实验。

技术优势

信息覆盖广泛：覆盖了多个quan威lncRNA数据库发布的数据；提供人，小鼠，大鼠的lncRNA检测。

lncRNA和mRNA同时检测：芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncRNA和mRNA进行分析。

平台成熟可靠：采用Agilent原位喷墨合成技术，了高检测灵敏度和特异性。

数据分析：提供lncRNA和mRNA表达谱差异分析和功能分析，以及二者的关联分析。

二、大肠菌群检验方法:

由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即:需氧及兼性厌氧、在37°C能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。而安捷伦和Illumina的探针能够在低密度下捕获更多数量的变异。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。

(一):采用三步法，即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。蛋白提取大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丁醇等有ji溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。乳糖发酵试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1C培养48土2h，观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36士1°C培养18-24h，观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°C培养24土2h,观察产气情况。

报告:

根据证实为大肠阳性的管数，查MPN表，报告每100ml ( g)大肠菌群的MPN值。具体操作参见GB4789. 3-94 《中华人民共和国食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》

(二)原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠进行检测。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。本方法采用两步法：推测试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36士1C培养48士2h，观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，36士1°C培养48士2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。具体操作参见SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法》

分子生物学检测服务

随着生命科学和化学的不断发展，人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。分子实验介绍——荧光检测细胞荧光染色是以荧光物质标记而进行抗原定位的技术。从单个的生物体到qi官到组织到细胞，再从细胞结构到核酸和蛋白的分子水平，人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构（如核酸序列），来横向比较不同物种，同物种不同个体，同个体不同细胞或不同生理（病理）状态的差异。这就为生物学和医学的各个领域提供了技术平台。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。近年来，分子生物学检测技术的方法学研究取得了进展，先后建立了各种分子生物学检测技术。