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实验动物的抓取和固定

在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。瑞士洛桑联邦理工学院的SilvestroMicera博士补充说：英国“废除解剖学”的JarrodBailey博士对此研究表示谴责。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。

实验动物的采集方法

1. 大鼠、小鼠的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用吸取少量的Hank平衡盐溶液，冲洗出胸骨或股骨中全部液。如果是取少量的作检查，可将胸骨或股骨剪断，将其断面的挤在有稀释液的玻片上，混匀后涂片凉干即可染色检查。

2. 大动物的采集：狗等大动物的采集可采取穿刺方法。外推法（Extrapolation）要冒风险，因为动物与人到底不是一种生物。 先将动物、固定、局部除毛、消毒皮肤，然后估计好皮肤到的距离，把穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧，右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入，穿入固定后，轻轻左右旋转将穿刺针钻入，当穿刺针进入腔时常有落空感。狗的采集，一般采用髂骨穿刺。

狗等大动物常用的穿刺点：胸骨：穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各点的中点。胫骨：穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔，防止发生。

1 被动吸烟模型

(1)方法  实验豚鼠(雌雄不限)，将豚鼠置放在封闭的通气隔离包中，每天暴露在xiang烟烟雾环境中(10支/次，1次/d，5d/周，连续1, 3, 6, 12个月作肺组织病理学及肺功能检查)，即可建立模拟人类吸烟引起的动物模型。

(2)模型特点  本模型病理表现 为进行性肺泡腔扩大、肺功能减退，造模12个月后即使停止给予动物烟雾暴露环境，模型动物肺泡腔的病理学改变仍可呈进行性发展，不能恢复正常。实验动物大、小鼠的采血方法1、动物实验中剪尾采血：需血量少时可用此方法。模型动物出现的百分比、病变轻重程度与吸烟时间密切相关；因模型时间较长，实验过程中影响因素较多，模型的稳定性相对较差。

2 蛋白酶模型

(1)方法  成年大鼠(雌雄不限)，经yi醚后仰卧固定头部及四肢，轻拉鼠舌，压迫舌腹，在额镜直视下，趁大鼠呼吸瞬间，迅速将已装有木瓜蛋白酶溶液连有的细塑料插管插入达气管分叉处，随后慢慢推入木瓜蛋白酶(2mg/kg体重)溶液，注入溶液体积控制在0.2ml/100g体重或以下。能改善jia亢模型大鼠甲状腺组织病理变化,其中高剂量组甲状腺组织结构基本同正常组。滴完溶液后，可辅助大鼠作各种直立、旋转等动作，以便所滴溶液在大鼠肺内均匀分布，然后大鼠自由饮水进食。

(2)模型特点  大鼠在造模4d后开始出现一系列的渐进理变化，肺功能检查模型大鼠第4日时的胸腔气体容积(TGV)值增加65％，而到第8日就不再变化，而造模前后大鼠气道阻力(Raw)值则变化无显著性差异。(三)慢性不可预见性应激模型大鼠经历一系列严重的应激因子(如噪声、强光刺激、长时间行为限制等)后表现出活动能力下降。病理组织学检查模型大鼠在发生早期(1周以内)主要是肺泡上皮细胞发生了破坏，而在晚期阶段则可见Ⅱ型肺泡上皮细胞增多，以及肺泡间隔内局限性胶原纤维及弹性纤维的聚集。但本模型(犬)在测定肺功能时表明，动物呼气流速的下降与静态顺应性的下降不成比例，同时病理组织学也证实动物气道萎缩，气道病变说明本模型不是单纯性的较佳模型。

Y迷宫实验几种常见的行为学测试方法

1、Y迷宫（Y-Maze）交替行为测试原理

Y-迷宫由Dellu F等发明，被广泛应用于功能减退、趋向性、空间工作记忆等研究领域。将动物固定，显露尾部，将尾尘剪去约5mm，从尾根部向尾端部，血即从断端流出。Y迷宫主要用于研究啮齿类动空间工作记忆，其完全是利用实验动物对新异环境探索的天性，由于动物每次转换探索方向时都需要记住前一次探索过的方向，因此Y型迷宫实验能够有效地测定动物的空间工作能力。

1.1  Y迷宫交替行为测试及参数

  自制Y迷宫，由3等长臂组成（50cm×18cm×35cm），每两个臂之间夹角为

120度，在中央处各有一个可移动的隔板，迷宫内臂及底部均涂为黑色。参照文献实验操作方法并加以改进，将大鼠放在Y迷宫任意一臂末端，任其自由探索8min，摄像系统记录动物8min的行为变化，记录以下各项指标：①总进臂次数（the total number of entries）：动物进入迷宫臂的次数（以大鼠四只脚均进入臂为进臂一次标准）；②轮流（交替）一次（an alternation）：依次连续进入Y迷宫全部三个臂一次。8周组大鼠出现明显气道壁增厚、气道狭窄及显著肺qi肿改变,气道壁炎细胞浸润、杯状细胞化生、气道壁坏死糜lan、纤维结缔组织及平滑肌增sheng等评分均显著高于对照组(P<。③*大轮流次数（The number of maximum alternati）：总进臂次数-2。自发轮流行为得分=总轮流次数/*大轮流次数*100%。