实验动物来电洽谈「英瀚斯」

难点与关键点

将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。

注意事项

1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。

2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。

3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。

4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。

5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。

6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

2强迫运动睡眠剥夺法

此类睡眠剥夺方法形式多样，在脑电监护情况下可行全部的睡眠剥夺和选择性的睡眠剥夺。其共同特点是通过动力装置迫使大鼠不停地运动，从而达到睡眠剥夺的目的。此类方法的优点是睡眠剥夺效果明显，睡眠剥夺的时间及强度易于掌握，重复性好，无须实验人员随时观察实验情况，减轻了实验人员工作强度。缺点是长时间运动引起机体的一系列应激反应可能干扰睡眠剥夺的实验结果，现选取其中两种有代表意义的方法介绍如下

2.1水平转盘睡眠剥夺法

此方法应用广泛，于 1983 年先应用在睡眠剥夺实验中，实验装置由一个电脑控制台、一个水平转盘及两个开放的长方形有机玻璃缸组成，转盘直径为 46 cm，在电脑控制下可以按顺时针逆时针方向随机水平转动! 两只有机玻璃缸的尺寸均为长60 cm ，宽20.5 cm，高 60 cm 。在距离缸底 5 cm 处的缸侧壁开有一条缝隙，使转盘的一半能分别从缝隙伸入两只玻璃缸中并能随意转动。缸底留置水约 2 cm 深，转盘离水面约3 cm 实验前1周将睡眠剥夺大鼠头颈部植入微电极' 并将微电极与电脑控制台相连，将大鼠放在转盘上适应环境1周，每天约1 h让大鼠习惯在转盘上活动，进水，进食等。实验时将实验组的大鼠及对照组的大鼠分别置于两只缸中的转盘上，当电脑通过微电极监测到实验组大鼠进入慢波或快波睡眠的脑电信号后，立即发出指令使转盘转动 6 s(6 s内转动 1/3 圈)，当大鼠被转到玻璃缸壁时，因被玻璃缸壁挡住而可能掉入水中，每次在实验组睡眠剥夺大鼠进入睡眠时转盘即转动 6 s，方向随机，转盘转动时两只大鼠均被动地随着转盘移动。此方法一次只剥夺一只大鼠睡眠，当实验组的睡眠剥夺大鼠在活动、进水、进食时转盘并不转动而此时对照组的大鼠则可趁机睡觉以弥补被剥夺的睡眠。此方法中睡眠剥夺组大鼠与对照组大鼠条件极其相似，因而可减少因实验条件不同而所致的应激反应。

2.2旋转圆筒睡眠剥夺法

此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中，设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm，高 30 cm 。圆筒底由 PVC (聚)构成，侧壁由直径为 10.4 m m 的 PVC 杆围成。杆长度 30 cm，杆之间间隔 15.5 m m，圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次，适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动，通过圆筒的转动带动大鼠不停运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行，睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间不停运动可引起机体的运动后应激反应及身体疲劳，可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化，有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。