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实验步骤

1、实验之前，一定要确保高架十字迷宫整个装置的清洁。这个步骤不仅仅是要求当天的实验，更加侧重于每一次动物实验完成后的清洁除味工作，一定要去除上一只动物在宫体内遗留下来的尿液、粪便等，尽可能创造一个清洁、无味道的理想试验环境。同时，实验员需要记录动物的编号、日期、状态等信息；实验动物提前运送到行为学实验室临时笼架 ,

适应环境至少3H左右, 减少动物紧张。

2、将实验动物（大鼠或者小鼠）从饲养笼中取出，实验动物尽量背向实验员，将动物轻轻放在仪器宫体的中央区域，动物面向开臂，然后实验员迅速安静的离开；

3、打开SuperMaze或者VisuTrack动物行为分析软件，跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动，自动计算指标，通常实验时长为5min；

4、实验结束后，取出实验动物，放入饲养笼，做好实验完成动物的标记信息，同时，用酒精和纸巾清洁迷宫。

在各种致病因素作用下，大脑实质受到损伤后可出现神经功能改变，如偏瘫、平衡失调等。

对于神经系统疾病动物模型而言，造模结束只是步，验证个体模型是否成功是第二步，而控制组内个体特征一致性是第三步。

采用神经功能评分是重要的观察指标，可以用来在体评价模型是否成功或者病变严重程度。尽量控制动物模型的评分一致性是很困难但不得不做的一件事。

这里介绍三种常见的啮齿类神经功能评分方法。

一、【Longa评分法】

① 无神经功能缺陷：0分；

②瘫痪侧前爪不能完全伸展：1分；

③行走时向瘫痪侧转圈：2分；

④行走时向瘫痪侧倾倒：3分；

⑤不能自动行走，存在意识丧失现象：4分。

二、【Bederson评分法】

抓起动物的尾巴，使动物离台面10cm高。此时，正常大鼠的前爪处于伸直状态，而存在神经功能病变的动物则可出现如下表现：

②动物尾巴提起后，瘫痪侧前肢回收并屈于腹下，而正常侧肢体伸向台面：1分；

③除第二条表现以外，俯卧于台面时向瘫痪侧侧推动物的阻力较正常侧明显降低：2分；

④除条和第二条以外，动物行走时向瘫痪侧旋转：3分。

三、【平衡木评分法】

一根长为80cm、宽为2.5cm的木条，水平固定在离台面10cm高度的地方，然后让动物在木条上行走。

①能跳上平衡木条，可以自由行走但不跌倒：0分；

②能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会小于50%：1分；

③能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会大于50%：2分；

④动物在正常侧身体的帮助下可以跳上平衡木条；但是瘫痪侧的后肢不能够帮助身体向前移动：3分；

⑤动物无法在平衡木条上行走，但是可以坐在木条上：4分；

⑥将动物放在木条上，动物很快会掉落下来：5分。

2强迫运动睡眠剥夺法

此类睡眠剥夺方法形式多样，在脑电监护情况下可行全部的睡眠剥夺和选择性的睡眠剥夺。其共同特点是通过动力装置迫使大鼠不停地运动，从而达到睡眠剥夺的目的。此类方法的优点是睡眠剥夺效果明显，睡眠剥夺的时间及强度易于掌握，重复性好，无须实验人员随时观察实验情况，减轻了实验人员工作强度。缺点是长时间运动引起机体的一系列应激反应可能干扰睡眠剥夺的实验结果，现选取其中两种有代表意义的方法介绍如下

2.1水平转盘睡眠剥夺法

此方法应用广泛，于 1983 年先应用在睡眠剥夺实验中，实验装置由一个电脑控制台、一个水平转盘及两个开放的长方形有机玻璃缸组成，转盘直径为 46 cm，在电脑控制下可以按顺时针逆时针方向随机水平转动! 两只有机玻璃缸的尺寸均为长60 cm ，宽20.5 cm，高 60 cm 。在距离缸底 5 cm 处的缸侧壁开有一条缝隙，使转盘的一半能分别从缝隙伸入两只玻璃缸中并能随意转动。缸底留置水约 2 cm 深，转盘离水面约3 cm 实验前1周将睡眠剥夺大鼠头颈部植入微电极' 并将微电极与电脑控制台相连，将大鼠放在转盘上适应环境1周，每天约1 h让大鼠习惯在转盘上活动，进水，进食等。实验时将实验组的大鼠及对照组的大鼠分别置于两只缸中的转盘上，当电脑通过微电极监测到实验组大鼠进入慢波或快波睡眠的脑电信号后，立即发出指令使转盘转动 6 s(6 s内转动 1/3 圈)，当大鼠被转到玻璃缸壁时，因被玻璃缸壁挡住而可能掉入水中，每次在实验组睡眠剥夺大鼠进入睡眠时转盘即转动 6 s，方向随机，转盘转动时两只大鼠均被动地随着转盘移动。此方法一次只剥夺一只大鼠睡眠，当实验组的睡眠剥夺大鼠在活动、进水、进食时转盘并不转动而此时对照组的大鼠则可趁机睡觉以弥补被剥夺的睡眠。此方法中睡眠剥夺组大鼠与对照组大鼠条件极其相似，因而可减少因实验条件不同而所致的应激反应。

5. 剥夺杆睡眠剥夺法

在标准实验室笼中采用间隙性的剥夺杆扫描进行触觉刺激来干扰自由行为的小鼠。该方法防止了人类接触和干预对睡眠剥夺的影响，并且在整个睡眠剥夺过程期间小化身体活动。此外，该程序准确且可预测。实验室动物从小都是在饲养笼中长大，基于实验室饲养笼使得动物能够保持在正常的社会环境中实施了一种相对无压力的方法来诱导动物睡眠剥夺模型，从而避免了外界环境及其他因素对睡眠剥夺的影响。此外，基于饲养笼式的睡眠剥夺仪易于组装和清洗，设计更加地人性化。